مهندسی ساخت و تولید ایران

مهندسی ساخت و تولید ایران

جداسازی اسپرم‌های سالم از ناسالم با ترکیب دو پدیده‌ی دی‌الکتروفورز و تیگموتاکسی

نوع مقاله : مقاله پژوهشی

نویسندگان
1 دانشجوی دکتری، دانشکده مهندسی مکانیک، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
2 استاد، پژوهشکده زیست‌فناوری رویان، پژوهشگاه رویان، اصفهان، ایران
3 استاد، دانشکده مهندسی مکانیک، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
4 دانشیار، پژوهشکده زیست‌فناوری رویان، پژوهشگاه رویان، اصفهان، ایران
5 دکتری، دانشکده مهندسی مکانیک، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران
چکیده
جداسازی اسپرم‌های سالم (متحرک و با بهترین ساختار DNA) به‌طور سنتی با روش‌های سانتریفیوژ شیب چگالی و یا شنا کردن به سمت بالا انجام می‌شود. در سال‌های اخیر، روش‌های مبتنی بر میکرو سیال توسعه پیداکرده و پیش‌بینی می‌شود که در آینده‌ای نه‌چندان دور جایگزین روش‌های سنتی شود. سیستم‌های میکرو سیال نیاز به حجم نمونه کمتری داشته، که ضمن خلوص بالاتر، دارای مزایایی از قبیل کاهش هزینه و کاهش زمان آزمایش است. در این تحقیق از ترکیب پدیده­ی تیگموتاکسی که در آن اسپر­م­ ها دیواره را دنبال می ­کنند با پدیده­ی دی­الکتروفورز مثبت که از میدان الکتریکی غیریکنواخت برای به دام انداختن ذرات استفاده می‌کند، یک عملگر میکروفلوئیدیک برای جدا کردن اسپرم­ های با تحرک بالا از اسپرم ­های با تحرک کمتر ارائه گردید. در این عملگر تعداد زیادی میکروکانال موازی تعبیه‌شده و اسپرم‌هایی که تحرک دارند، دیواره­های این کانال‌ها را گرفته و به سمت انتهای آن‌ها حرکت می‌کنند. در طول مسیر، با اعمال میدان الکتریکی متناوب در فرکانس 1 مگاهرتز و ولتاژ 3 ولت، نیروی دی­الکتروفورز مثبت اعمال‌شده و اسپرم ­های با تحرک کم را به دام انداخته اما اسپرم ­های با تحرک بالا توانایی فرار از میدان الکتریکی را داشته و خود را به قسمت خروجی کانال می­ رسانند. به‌منظور بررسی میدان الکتریکی و بررسی جریان سیال در سیستم طراحی‌شده، از نرم‌افزار کامسول استفاده گردید. بر مبنای طراحی و شبیه­ سازی انجام‌شده عملگر جداسازی اسپرم ­ها ساخته شد. نتایج آزمایش ­های بالینی نشان داد، تحرک اسپرم­های خروجی سیستم طراحی­ شده نسبت به ورودی آن از 54% به 81% و حیات اسپرم ­ها نیز از 56% به 75%، افزایش‌ یافت.
کلیدواژه‌ها

عنوان مقاله English

Separation of healthy sperms using dielectrophoresis and thigmotaxis phenomena

نویسندگان English

Alireza Khouzestani 1
Mohammad Hossein Nasr-Esfahani 2
Yousef Hojjat 3
Marziyeh Tavalaee 4
Hesam Sadeghian 5
1 PhD Student, Department of Mechanical Engineering, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
2 Professor, Royan Biotechnology Research Institute, Royan Institute, Isfahan, Iran
3 Professor, Department of Mechanical Engineering, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
4 Associate Professor, Royan Biotechnology Research Institute, Royan Institute, Isfahan, Iran
5 PhD, Department of Mechanical Engineering, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran
چکیده English

Separation of healthy sperm (motile and with the best DNA structure) is traditionally done by density gradient centrifugation or upward swimming methods. In recent years, microfluidic methods have been developed to separate motile sperm with the best morphology and DNA structure and will replace traditional methods in close future. Microfluidic systems require a smaller sample volume, which, in addition to higher purity, has advantages such as cost reduction and test time reduction.. In this research, by using thigmotaxis phenomenon in which sperms follow the channel wall and also positive dielectrophoresis phenomenon in which traps the particles based on applying non uniform electric field, a microfluidic actuator is presented. By using a large number of microchannel parallel to each other, the motile sperm, follow the walls and move to the end of channels. Then, by applying 1 MHz in 3 V, the positive dielectrophoresis force traps the sperms with low motility, but the sperms with high motility have the ability to escape from the electric field and reach the outlet of the channel. In order to check the electric field and also the fluid flow in the channels, Comsol software was used. Based on the design and simulation, the sperm separation actuator was manufactured and tested. The clinical tests results showed that compared to the inlet of the device, the motility was increased from 54% to 81% and the viability was increased from 56% to 75% in the outlet of the manufactured system.

کلیدواژه‌ها English

Sperm
Microfluidic
Dielectrophoresis
Separation
Thigmotaxis
[1] Brugo-Olmedo S, Chillik C, Kopelman S. Definition and causes of infertility. Reproductive biomedicine online. 2001 Jan 1;2(1):173-85. doi: 10.1016/S1472-6483(10)62193-1
[2] Zini A, Finelli A, Phang D, Jarvi K. Influence of semen processing technique on human sperm DNA integrity. Urology. 2000 Dec 1;56(6):1081-4. doi: 10.1016/S0090-4295(00)00770-6
[3] Sarbandi IR, Lesani A, Moghimi Zand M, Nosrati R. Rheotaxis-based sperm separation using a biomimicry microfluidic device. Scientific reports. 2021 Sep 15;11(1):18327. doi: 10.1038/s41598-021-97602-y
[4] Whitesides GM. The origins and the future of microfluidics. nature. 2006 Jul 27;442(7101):368-73. doi: 10.1038/nature05058
[5] Reyes DR, Iossifidis D, Auroux PA, Manz A. Micro total analysis systems. 1. Introduction, theory, and technology. Analytical chemistry. 2002 Jun 15;74(12):2623-36. doi: 10.1021/ac0202435
[6] Xie L, Ma R, Han C, Su K, Zhang Q, Qiu T, Wang L, Huang G, Qiao J, Wang J, Cheng J. Integration of sperm motility and chemotaxis screening with a microchannel-based device. Clinical chemistry. 2010 Aug 1;56(8):1270-8. doi: 10.1373/clinchem.2010.146902
[7] Pérez-Cerezales S, Laguna-Barraza R, de Castro AC, Sánchez-Calabuig MJ, Cano-Oliva E, de Castro-Pita FJ, Montoro-Buils L, Pericuesta E, Fernández-González R, Gutiérrez-Adán A. Sperm selection by thermotaxis improves ICSI outcome in mice. Scientific Reports. 2018 Feb 13;8(1):2902. doi: 10.1038/s41598-018-21335-8
[8] Ainsworth CJ, Nixon B, Aitken RJ. The electrophoretic separation of spermatozoa: an analysis of genotype, surface carbohydrate composition and potential for capacitation. International Journal of Andrology. 2011 Oct;34(5pt2):e422-34. doi: 10.1111/j.1365-2605.2011.01164.x
[9] Simon L, Murphy K, Aston KI, Emery BR, Hotaling JM, Carrell DT. Micro-electrophoresis: a noninvasive method of sperm selection based on membrane charge. Fertility and Sterility. 2015 Feb 1;103(2):361-6. doi: 10.1016/j.fertnstert.2014.10.047
[10] Esfahani MH, Deemeh MR, Tavalaee M, Sekhavati MH, Gourabi H. Zeta sperm selection improves pregnancy rate and alters sex ratio in male factor infertility patients: a double-blind, randomized clinical trial. International Journal of Fertility & Sterility. 2016 Jul;10(2):253. doi: 10.22074/ijfs.2016.4917
[11] de Wagenaar B, Dekker S, de Boer HL, Bomer JG, Olthuis W, van den Berg A, Segerink LI. Towards microfluidic sperm refinement: impedance-based analysis and sorting of sperm cells. Lab on a Chip. 2016;16(8):1514-22. doi: 10.1039/C6LC00256K
[12] Ahmadkhani N, Saadatmand M, Kazemnejad S, Abdekhodaie M. Qualified sperm selection based on the rheotaxis and thigmotaxis in a microfluidic system. Biomedical Engineering Letters. 2023 Jun 6:1-0.
[13] Zaman MA, Padhy P, Wu M, Ren W, Jensen MA, Davis RW, Hesselink L. Controlled transport of individual microparticles using dielectrophoresis. Langmuir. 2022 Dec 21;39(1):101-10. doi: 10.1021/acs.langmuir.2c02235
[14] Riccardi M, Martin OJ. Electromagnetic forces and torques: From dielectrophoresis to optical tweezers. Chemical Reviews. 2023 Jan 31;123(4):1680-711. doi: 10.1021/acs.chemrev.2c00576
[15] Gascoyne PR, Noshari J, Anderson TJ, Becker FF. Isolation of rare cells from cell mixtures by dielectrophoresis. Electrophoresis. 2009 Apr;30(8):1388-98. doi: 10.1002/elps.200800373
[16] Sadeghian H, Hojjat Y, Soleimani M. Interdigitated electrode design and optimization for dielectrophoresis cell separation actuators. Journal of Electrostatics. 2017 Apr 1;86:41-9. doi: 10.1002/elps.200800373
[17] Li D, Yu W, Zhou T, Li M, Song Y, Li D. Conductivity-difference-enhanced DC dielectrophoretic particle separation in a microfluidic chip. Analyst. 2022;147(6):1106-16. doi: 10.1039/D1AN02196F
[18] Coll De Peña A, Mohd Redzuan NH, Abajorga MK, Hill N, Thomas JA, Lapizco-Encinas BH. Analysis of bacteriophages with insulator-based dielectrophoresis. Micromachines. 2019 Jul 4;10(7):450. doi: 10.3390/mi10070450
[19] Khoshmanesh K, Nahavandi S, Baratchi S, Mitchell A, Kalantar-zadeh K. Dielectrophoretic platforms for bio-microfluidic systems. Biosensors and Bioelectronics. 2011 Jan 15;26(5):1800-14. doi: 10.1016/j.bios.2010.09.022
[20] Fuhr G, Müller T, Baukloh V, Lucas K. High-frequency electric field trapping of individual human spermatozoa. Human reproduction (Oxford, England). 1998 Jan 1;13(1):136-41. doi: 10.1093/humrep/13.1.136
[21] Garcia MM, Ohta AT, Walsh TJ, Vittinghof E, Lin G, Wu MC, Lue TF. A noninvasive, motility independent, sperm sorting method and technology to identify and retrieve individual viable nonmotile sperm for intracytoplasmic sperm injection. The Journal of urology. 2010 Dec 1;184(6):2466-72. doi: 10.1016/j.juro.2010.08.026
[22] Rosales-Cruzaley E, Cota-Elizondo PA, Sánchez D, Lapizco-Encinas BH. Sperm cells manipulation employing dielectrophoresis. Bioprocess and biosystems engineering. 2013 Oct;36(10):1353-62. doi: 10.1007/s00449-012-0838-6
[23] Huang HY, Kao WL, Wang YW, Yao DJ. Using a dielectrophoretic microfluidic biochip enhanced fertilization of mouse embryo in vitro. Micromachines. 2020 Jul 23;11(8):714. doi: 10.3390/mi11080714
[24] Koh JB, Marcos. Effect of dielectrophoresis on spermatozoa. Microfluidics and Nanofluidics. 2014 Oct;17:613-22. doi: 10.1007/s10404-014-1342-x
[25] Wongtawan T, Dararatana N, Thongkittidilok C, Kornmatitsuk S, Oonkhanond B. Enrichment of bovine X-sperm using microfluidic dielectrophoretic chip: A proof-of-concept study. Heliyon. 2020 Nov 1;6(11). doi: 10.1016/j.heliyon.2020.e05483
[26] Hughes MP, Morgan H. Measurement of bacterial flagellar thrust by negative dielectrophoresis. Biotechnology progress. 1999;15(2):245-9. doi: 10.1021/bp990019+
[27] Nosrati R, Vollmer M, Eamer L, San Gabriel MC, Zeidan K, Zini A, Sinton D. Rapid selection of sperm with high DNA integrity. Lab on a Chip. 2014;14(6):1142-50. doi: 10.1039/C3LC51254A
[28] Vasilescu SA, Ding L, Parast FY, Nosrati R, Warkiani ME. Sperm quality metrics were improved by a biomimetic microfluidic selection platform compared to swim-up methods. Microsystems & Nanoengineering. 2023 Mar 28;9(1):37. doi: 10.1038/s41378-023-00501-7
[29] Jones TB. Electromechanics of particles. (No Title). 1995 Oct 27.
[30] Abd Rahman N, Ibrahim F, Yafouz B. Dielectrophoresis for biomedical sciences applications: A review. Sensors. 2017 Feb 24;17(3):449. doi: 10.3390/s17030449
[31] Ghomian T, Hihath J. Review of dielectrophoretic manipulation of micro and nanomaterials: Fundamentals, recent developments, and challenges. IEEE Transactions on Biomedical Engineering. 2022 Jun 15. doi: 10.1109/TBME.2022.3183167
[32] Elgeti J, Kaupp UB, Gompper G. Hydrodynamics of sperm cells near surfaces. Biophysical journal. 2010 Aug 9;99(4):1018-26.
[33] Nascimento JM, Shi LZ, Meyers S, Gagneux P, Loskutoff NM, Botvinick EL, Berns MW. The use of optical tweezers to study sperm competition and motility in primates. Journal of the Royal Society Interface. 2008 Mar 6;5(20):297-302. doi: 10.1098/rsif.2007.1118
[34] Khouzestani A, Hojjat Y, Tavalaee M, Sadeghian H, Nasr-Esfahani MH. Enhancing the Accuracy of Measuring DEP Force Applied on Cells by Considering the Friction Effect. Biosensors. 2023 May 12;13(5):540.
[35] Makler A, Jakobi P. Effects of shaking and centrifugation on human sperm motility. Archives of andrology. 1981 Jan 1;7(1):21-6.